Реагент антитела EGFR для иммуногистохимии

 【Название продукта 】

Реагент EGFR Antibody —— Первичное антитело

【Использование по назначению 】

Только для исследовательского использования. Реагент EGFR Antibody  предназначен для качественной идентификации EGFR  методом микроскопии в срезах ткани FFPE с использованием системы иммуногистохимической детекции .

【Принцип 】_

EGFR является членом семейства рецепторов фактора роста  I  типа, которое состоит из внеклеточного функционального домена, способного связывать эпидермальный фактор роста, короткого трансмембранного домена и внутриклеточного домена с тирозинкиназной активностью. EGFR экспрессируется во многих нормальных тканях, особенно в базальном слое многослойного эпителия и плоского эпителия. Сверхэкспрессия EGFR обнаруживается во многих видах опухолевых тканей, таких как опухоли груди, мочевого пузыря, легких, желудка, пищевода и головы и шеи.  Добавьте первичное антитело для связывания антигена на срезах ткани , а затем используйте вторичное антитело, меченное HRP, связывающее первичное антитело , чтобы сформировать   Комплекс вторичное антитело -  первичное антитело - антиген  . При добавлении хромогенного раствора DAB HRP реагирует с субстратом фермента с образованием нерастворимого продукта реакции коричневого цвета, что косвенно указывает на наличие антигена. 

【Основные компоненты 】

I иммуноглобулин, разбавитель антител

【Хранение 】

Хранить при температуре 2～8℃  в течение 18  месяцев .

【Требования к образцам 】

Ткани FFPE обычно разрезают на срезы толщиной от 3 до 5 мкм с помощью микротома.  Эти срезы затем монтируются на предметные стекла, покрытые тканевым клеем.

【Протокол 】

1.  Подготовка образцов : Депарафинируйте предметные стекла в ксилоле Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ  в течение 5 минут ; Перенесите предметные стекла один раз через 100%, 100%, 95% , 75%  спирты  на 2 минуты соответственно. Промойте слайды деионизированной водой в течение 30 секунд.

2 . Блокирование : Блокируйте активность эндогенной пероксидазы, инкубируя срезы в 3%  растворе  H ₂ O ₂ при комнатной температуре в течение 5 минут , чтобы  заблокировать активность эндогенной пероксидазы. Промойте слайды деионизированной водой в течение 30 секунд.

3 . Извлечение антигена : Нагрейте буфер для извлечения антигена с ЭДТА до 100 ℃ . Затем поместите предметные стекла в прокипяченный буфер и продолжайте нагревать в течение 15–20 мин . Естественно остыть в течение 30 минут. Промойте образец промывочным буфером.

4 . Инкубация первичных антител: Слейте предметные стекла. Добавьте к ткани первичные антитела , инкубируйте при комнатной температуре в течение  30 минут . (в качестве контроля используйте разбавитель антител или PBS) . Вымойте слайды в PBST 2 раза по 5 минут каждый раз. Если первичное антитело концентрированное, разведите его до RTU (готово к использованию) в соответствии с информацией на упаковке . 

5.  Вторичное антитело  : Слейте предметные стекла. Добавьте вторичное антитело  к ткани и инкубируйте при комнатной температуре в течение  20 минут . Промойте предметные стекла в PBST 2 раза по 5 минут каждый раз .

6. DAB ：Слейте предметные стекла. Добавьте DAB  в ткань и инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 мин. Промойте слайды деионизированной водой.

7. Окрашивание гематоксилином : Слейте предметные стекла. Добавьте к ткани гематоксилин и инкубируйте при комнатной температуре в течение 5 минут . Промойте слайды водой. Используйте раствор кислоты для дифференциации . Промойте слайды водой.

8. Обезвоживание : Обезвоживание предметных стекол в 75% , 95% , 100%  спирте в течение 2 минут .  Высушите слайды. Накройте окрашенную ткань покровным стеклом, используя монтажную среду.

【Положительная локализация 】

1.  Положительная локализация : клеточная мембрана / цитоплазма.

2.  Положительный контроль: ткань плаценты.

【Меры предосторожности 】

1.  Пожалуйста, внимательно прочитайте инструкцию и ознакомьтесь со всеми компонентами набора перед использованием. Строго следуйте инструкции во время работы.

2.  НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ комплект или какой-либо компонент комплекта после их .

3.  Только обученные специалисты могут использовать этот комплект. Пожалуйста, надевайте подходящий лабораторный халат и одноразовые перчатки при работе с реагентами.

4.  Избегать попадания химикатов на кожу, глаза и слизистые оболочки.

5.  НЕ пипетировать ртом.

6.  Неиспользованные реагенты, использованный набор и отходы необходимо утилизировать в соответствии с местным законодательством.

【Производитель 】_

Название компании: Xiamen Talent Biomedical Technology Co., Ltd.

Адрес: 3 -й и 4-й этажи, здание B10, № 2068 Wengjiao Road West, BioMedical Park, Haicang District, Xiamen City, 36100 China.

Тел: +86 592 6315755            

Электронная почта : tlsw@talentbiomedical.com                

сайт : www.talentbiomedical.com

【 Символы 】